Agarose de gelelektroforese is een algemeen gebruikte methode voor isolatie, identificatie en reiniging van DNA-fragmenten. Wanneer DNA-de molecules in agarose gel zwemmen, hebben zij lasteneffect en moleculair zeefeffect. DNA-de molecules zijn negatief - geladen in pH oplossing boven isoelectric punt en bewegen zich aan de positieve elektrode op het elektrische veld. wegens de herhaalde structuur van de glycophosphatebackbone, heeft dezelfde hoeveelheid dubbele vastgelopen DNA bijna dezelfde netto last, zodat kunnen zich zij aan de positieve richting bij dezelfde snelheid bewegen.
De verschillende concentraties van agarose gel kunnen DNA-fragmenten van 200bp aan 50kb scheiden. In de agarose oplossing, werd de lage concentratie van ethidumbromide (EB) toegevoegd in de agarose oplossing. De DNA-band van 10NG zou onder UVlicht kunnen worden ontdekt. Op het elektrische veld, negatief - geladen DNA migreerde aan de anode in pH8.0.
Agarose het gel heeft de volgende kenmerken:
(1) de moleculaire grootte van DNA in de gelmatrijs is omgekeerd evenredig aan de waarde van het basislogaritme, en groter de molecule, langzamer de migratie.
(2) agarose de concentratie in een specifieke grootte van lineaire DNA-molecule is verschillend van agarose gel in verschillende concentraties. Het logaritme van elektroforetische mobiliteit (u) van DNA is lineair verwant met gelconcentratie (t).
(3) wanneer het voltage laag is, is het migratietarief lineaire DNA-fragmenten evenredig aan het toegepaste voltage. Nochtans, met de verhoging van elektrisch veld intensiteit, zal de mobiliteit van DNA-fragmenten met verschillende molecuulgewichten in verschillende waaiers stijgen. Met de verhoging van voltage, zal het efficiënte scheidingswerkingsgebied van agarose gel worden verminderd. om de resolutie van DNA-fragmenten te maximaliseren groter dan 2KB, zou het toegepaste voltage 5V/geen cm moeten overschrijden.
(4) het elektroforetische gedrag van DNA van de elektroforesetemperatuur in agarose gelelektroforese wordt niet beïnvloed door de temperatuur van elektroforese. Het relatieve migratietarief DNA-fragmenten van verschillende grootte verandert niet beduidend tussen 4 en 30 graden, maar het gel met lage concentratie van 0,5% of het puntgel met een laag smeltpunt zijn vrij zwak, bij voorkeur bij 4 graden.
(5) de kleurstof bedde fluorescent kleurstofethidium bromide in werd gebruikt om DNA in agarose gel te ontdekken. De kleurstof werd ingebed in de gestapelde basisparen en verlengde en inkerfte cirkeldna die, die het stijver maken en de lineaire mobiliteit verminderen door 15%.
(6) de samenstelling van de buffer van de Ionische sterkteelektroforese en zijn Ionische sterkte beïnvloeden de mobiliteit van DNA-elektroforese. Bij gebrek aan ionen, zoals misbruik van gedistilleerd water om gelen voor te bereiden, is het geleidingsvermogen de minimale en nauwelijks bewegingen van DNA. In hoge Ionische sterktebuffer (zoals 10 x elektroforesebuffer), is het geleidingsvermogen zeer hoge en duidelijke hitteproductie.
Agarose de gelelektroforese ook algemeen gebruikt=wordt= in isolatie en identificatie van nucleic zuren, zoals DNA-identificatie, DNA-beperkingsendonuclease kaartproductie enz. Wegens zijn geschikte verrichting, eenvoudig materiaal, kleine steekproefgrootte en hoge resolutie, is deze methode één van de gemeenschappelijke experimentele methodes in genetische biologieonderzoek geworden. Agarose de uitrusting van de gelelektroforese bevat 10 agarose voorvormen, oplossing 15mL van de hoogspannings de snelle elektroforese, DNA-lading buffer6x 200 L, schaar en gebruikershandleidingen, met 8 gat 6*6, 6 gat 6*6, 13 gat 6*12, 18 gat 6*12 en andere specificaties.
