Cyclohexylamine van CAS 1135-40-6 CAPS het Zuur van Propanesulfonic in Experiment

Cyclohexylamine propanesulfonic zuur CAPS is een algemeen gebruikte biochemische grondstof. Het kan als genezende agent voor stromen, deshydratiemiddelen, en isocyanaat op basis van water in deklagen worden gebruikt. In de biochemische industrie, wordt het gewoonlijk gebruikt als biologische buffer. Volgens zijn zuiverheid en onzuiverheidsinhoud, is de toepassingsindustrie ook verschillend.

Van het standpunt van moleculaire structuur, is CAPS een cyclohexane N-substituted sulfamic zuur en amfoteer met een molecuulgewicht van 221,32. Het is een zeer goede biologische buffer met een pH bufferwaaier van 9.7-11.1. Het wordt gewoonlijk gebruikt voor WB experimenten. De buffer voor eiwitpvdf-overdrachtmembraan of het nitrocellulose NC brengt membraan over.

WB tribunes voor westelijk vlekken eiwit immunoblotting experiment. Het principe is cellen of biologische monsters te kleuren door gelelektroforese met specifieke antilichamen worden behandeld, en de uitdrukking van specifieke proteïnen in de geanalyseerde cellen of weefsels te verkrijgen door de positie en de diepte van de kleuring te analyseren die. Informatie. De experimentele nota's zijn als volgt:

CAPS-reagens

1. Sds-PAGINA elektroforese: gelijkaardig aan nucleic zuur zijn de kruisingsmethode, behalve dat ontdekt de proteïne, is de sonde het antilichaam, en het gekleurde secundaire antilichaam wordt geëtiketteerd. In het algemeen, tri-Glycerine of tris-Tricine buffer wordt het systeem gebruikt voor laag - de molecuulgewichtproteïnen, en CAPS-het buffersysteem zijn beter voor hoogte - molecuulgewichtproteïnen. De glycine in de buffer zal het rangschikken beïnvloeden, zodat is de overdrachtbuffer voor het rangschikken wordt gebruikt 10mM/1CAPS10% methanol die. De concentratie van methanol in CAPS die buffer electroimprinting is 0-20%. Over het algemeen, heeft een buffer met een hoge methanolconcentratie een goed overdrachteffect op low-molecular-weight proteïnen, terwijl een buffer met een lage methanolconcentratie of zelfs geen methanol voor hoge molecuulgewichtproteïnen goed is. Overdracht.

2. Wanneer PVDF-het membraan wordt verwerkt, doorweek het gedurende enkele seconden in methanol, en zet het dan in CAPS die buffer electroimprinting. De opvolgendeverrichtingen moeten het membraan verhinderen uit te drogen. Als het PVDF-membraan droog wordt, herhaal de vorige stappen. Het elektroforesegel moet ook in CAPS-buffer 5-10 minuten worden doorweekt. Sommige sterk basisproteïnen vergen deze stap niet.

3. De overdrachtvoorwaarden zijn gewoonlijk het constante voltage van 50V, de huidige intensiteit van 100-170mA, en electroimprint overdracht bij kamertemperatuur. De bellen tussen het gel en PVDF-membraan moeten worden verwijderd. Voor proteïnen met hoger molecuulgewicht, besteed aandacht om de overdrachttijd te verlengen.

4. Alvorens te verven, PVDF-moet het membraan worden genomen en met gedeioniseerd die water, in methanol wordt, dan met 0,1% briljant blauw van Coomassie 30-50 verkleurde seconden wordt geverft doorweekt die, met 50%-gewassen methanol, met gedeioniseerd water worden gespoeld en droog.

Bovengenoemd introduceert sommige kwesties die aandacht vergen in het eiwit het stempelen experiment. Naast het experiment zelf, Desheng-herinnert de Technologie u eraan dat voor veiligheid en gezondheid, gelieve laboratoriumkleren en slijtage beschikbare handschoenen voor verrichting te dragen. CAPS elektro-stempelt buffer wordt geadviseerd om door Desheng de configuratie van cyclohexylamine het propanesulfonic zuur worden veroorzaakt van uitstekende kwaliteit.