De Zure Buffer van 1,4-Piperazinediethanesulfonic van de voorbereidingsmethode

Een zeer efficiënte methode voor de bereiding van 1,4-piperazinediethanesulfonsuurbuffer

Piperazine-diethanesulfonsuur PIPES heeft een verscheidenheid aan buffersystemen.waaronder de bufferoplossing Transformation Buffer (ook wel TB-oplossing genoemd) kan worden gebruikt om zeer efficiënte bevoegde cellen voor te bereiden.

Competent state refers to a special physiological state in which cells (or bacteria) can take up DNA molecules from the surrounding environment and are not easily broken down by restriction endonucleases in the cellSommige bacteriën zijn van nature bekwaam, zoals Bacillus subtilis, en sommige zijn kunstmatig bekwaam, zoals Escherichia coli.Het behandelen van de recipiëntcellen met een speciale methode kan de doorlaatbaarheid van het celmembraan veranderen, waardoor het een competente cel is die dragermoleculen met vreemd DNA door laat gaan.

Toereikende TB-oplossing grondstof-PIPES-poeder

Voorbereiding van transformatiebuffer:

Voor de transformatie van bekwame bacteriële cellen wordt gebruik gemaakt van de calciumchloride methode.37 graden's nachts tot een enkele kolonie groeit.Kies een kolonie met een diameter van 1-3 mm om het SOB-medium te inoculeren in een 250 ml/3L Erlenmeyer-kolf of 80 ml/1L Erlenmeyer-kolf.Stop de cultuur als de OD600 ongeveer 0 is..4-0.8, koelen in 4 graden ijswater gedurende 10 minuten, centrifugeer bij 300 RPM gedurende 15 minuten, herstellen van de bacteriën na het verwijderen van de supernatant, suspendeer in 1/3 volume van ijskoud TB oplossing,en centrifugeer opnieuw gedurende 10 minuten om de bacteriën te herstellenSuspendeer met 1/12,5 volume TB, voeg DMSO toe met een eindconcentratie van 7%, koel vervolgens 10 minuten in aliquota van 0,1-1 ml en bewaar rechtstreeks in vloeibare stikstof of bij -80°C.

In de TB-oplossing van gesuspendeerde Escherichia coli omvatten de belangrijkste componenten buffer PIPES en calciumchloride om cellen te transformeren in bevoegde cellen.Opgemerkt zij dat deze methode geschikt is voor E. coli stammen die geen plasmiden bevatten en niet geschikt zijn voor grote plasmiden.de optimale OD600 van verschillende bacteriestammen is ook anders, en moet worden aangepast volgens verschillende experimenten.

Er zijn veel methoden om bevoegde cellen voor tuberculose te bereiden, en de efficiëntie van verschillende methoden kan verschillen, en de toepasselijke stammen of celtypen kunnen ook verschillen.De door Desheng geproduceerde PIPES is een poederreagens, en de juiste TB-oplossingen kunnen worden bereid op basis van verschillende behoeften.

Desheng Biochemical is een fabrikant gespecialiseerd in de productie van biologische buffers in China.4- ((2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonsyre, 3-Cyclohexylaminopropanesulfonsuur, etc., allemaal met een zuiverheid van meer dan 99%, indien nodig zakelijke vrienden van u kunt contact met ons opnemen!