Acridine de ester kan DNA-schade ontdekken door formaldehyde dat en acetaldehyde wordt veroorzaakt!

Verschillende exogene en endogene factoren, zoals milieuverontreinigende stoffen, ioniserende straling, chemotherapie en celmetabolisme, kunnen verschillende vormen van DNA-schade veroorzaken.DNA-dubbelstrengbrekingen veroorzaken de ernstigste schade aan de stabiliteit van het genoom en kunnen de overleving van cellen bedreigenHet opzetten van een eenvoudige, snelle en gevoelige methode voor het detecteren van DNA-hybride en genotoxiciteitseffecten is een zeer betekenisvol onderzoeksonderwerp.Hier is een korte inleiding tot de methode van DNA-beschadiging detectie.

Wat zijn de soorten DNA-schade detectie

DNA-schade detectie methoden omvatten gel elektroforese, ultraviolette spectrophotometrie, fluorescentie en elektrochemie, en chemiluminescentie analyse.Chemiluminescentieanalyse (CL) wordt veel gebruikt op het gebied van milieu- en biowetenschappen vanwege de hoge gevoeligheidHet gebruik van formaldehyde en acetaldehyde is een milieuverontreinigende stof en kan tot op zekere hoogte DNA-schade veroorzaken.Onderzoek de hoeveelheid acridinium-esters in het DNA vóór en na de beschadiging door formaldehyde en acetaldehyde, die veranderingen in de chemiluminescentieintensiteit van acridiniumesters veroorzaken, en het beschadigingsgedrag van formaldehyde en acetaldehyde op DNA bestuderen.Een eenvoudige chemiluminescentie-analysemethode om de mate van DNA-schade veroorzaakt door formaldehyde en acetaldehyde te evalueren.

Acridine-esters methode voor het detecteren van milieuschade aan DNA

1De gebruikte glazen luminescerende cel wordt eerst enkele uren in een bepaalde hoeveelheid geconcentreerd stikstofzuur gedrenkt, verzuren en vervolgens met water spoelen.Voeg 20 μL van 1 mg/ml DNA van de kalfthymus toe aan de verzurte luminescerende celHet DNA wordt op de bodem van het lichtzendende zwembad geadsorbeerd.en dan wordt het niet-adsorbeerde DNA van de kalfthymus met secundair water gewassen om het lichtemitterende zwembad met adsorbeerd DNA te krijgen.

2. Voeg 50 μl van 9,6 × 10-7 g/ml toeacridiniumesterDe chemerisatiereactie duurt 1 uur om de AE in de DNA-dubbelstrengstructuur te verwerken en de unchimerische AE met secundair water weg te spoelen.in de luminescerende cel Voeg in sequentie luminesceringsinitiatie-reagentia toe om de chemiluminescentie te detecteren die wordt gegenereerd door in het DNA chimeriserende AEBij het detecteren van schade aan het DNA van de kalfthymus door formaldehyde en acetaldehyde, voegt u na AE-chimerisatie een beschadigingsreagens aan het DNA toe en gebruikt u het na een bepaalde periode.Het tweede water spoelt de AE weg die vrijkomt nadat het DNA is beschadigd., en het reagens voor het initiëren van de luminescentie wordt toegevoegd om de chemiluminescentie-intensiteit van de AE-chimeriek in het DNA te detecteren.

Studies hebben aangetoond dat acridiniumester kan worden gebruikt als chemiluminescentie-indicator met een goede structuur van intercalating DNA-dubbele helix.Deze detectiemethode is haalbaar voor DNA-breukbeschadiging en chemiluminescentie detectiemethodeHet heeft de voordelen van eenvoud en gevoeligheid. Schadeonderzoeken bieden een eenvoudige onderzoeksmethode.thermische stabiliteit en een hoge signaal-geluidsverhouding, en de etiketteringsomstandigheden zijn mild, het etiketteringspercentage is hoog en de scheiding heeft geen invloed op de scheiding na het etiketteren. , dus het wordt beschouwd als een ideale chemische marker.