Voordelen van biobuffer HEPES in celcultuur

HEPESis een belangrijk biochemisch preparaat in de biochemische industrie. Het wordt beschouwd als een van de belangrijke buffers op het gebied van biologisch onderzoek.N-hydroxyethylpiperazine-1-ethanesulfonsyreHet is een zwak zuur, vaak gebruikt als zwitterion buffer en farmaceutisch tussenproduct in de organische chemische industrie.Het wordt vaak geselecteerd als buffer voor celcultuur vanwege de voordelen ervan:

De locatie en bufferproducten van Desheng

1De ontbindingscapaciteit van HEPES kan met de temperatuurstijging worden verhoogd en met de temperatuurstijging worden verzwakt, maar in vergelijking met andere buffers is de ontbindingscapaciteit van HEPES aanzienlijk lager.De ontbindingsconstante verandert niet veel met de temperatuur., waardoorHEPES-bufferDe buffer kan een constant pH-bereik voor een langere periode beheersen en heeft geen giftig effect op cellen.

2De vereiste pH voor de meeste cellen is 7,2-7.4Het HEPES heeft een goede buffercapaciteit in dit bereik, maar de optimale pH-waarde varieert afhankelijk van het soort cel dat wordt gekweekt.In het geval van subcultuurlijnen is een zure pH vereist (7De meeste kweekmiddelen zijn afhankelijk van natriumbicarbonaat (NaHCO3) en CO2-systeem voor buffering.De CO2-concentratie in de gasfase moet worden afgewogen met de natriumbicarbonaatconcentratie in het kweekmedium.In dit geval mag de dop van de celcultuurfles niet te strak worden geschroefd om de gasuitwisseling te waarborgen.

Na opslag voor een bepaalde periode zal de pH van het buffersysteem echter toenemen met de vluchtigheid van CO2.de cultuuroplossing wordt snel paars wanneer de cel wordt gesubkultiveerd en geblazenZelfs als het overleefd, is de activiteit ook erg laag, en de proliferatie snelheid is erg traag.Het toevoegen van HEPES aan de cultuuroplossing kan dit probleem voorkomenHEPES kan als buffer worden gebruikt om bicarbonaat te vervangen om de beperking van de cultuuromgeving met een hoge CO2-concentratie te elimineren..

Hoe wordt HEPES gebruikt:

1. HEPES kan rechtstreeks aan de bereide kweekoplossing worden toegevoegd met de vereiste concentratie en vervolgens worden gesteriliseerd door filtratie.de pH-waarde aanpassen op 7.2 met lN NaOH na oplosing, filteren en steriliseren en gebruiken Op dit moment is de gebruiksconcentratie van HEPES 10 mmol/l.

2Het kan ook worden bereid tot 100 x opslagoplossing (l mol/l). Voordat het wordt gebruikt, wordt 99 ml cultuuroplossing toegevoegd aan lml opslagoplossing, waarbij de eindtoepassingsconcentratie nog steeds 10 mmol/l is.l mol/L (100 x) methode voor het bereiden van de HEPES-stamoplossing: oplossen van 23,8 g HEPES in 90 ml dubbeldestilleerd water, pH aanpassen tot 7,5-8,0 met 1N NaOH, vervolgens verdunnen tot 100 ml water, filteren en steriliseren, en injectieflaconen uitdelen (2 ml/fles), bewaren bij 4°C of -20°C.

Desheng Biochemical herinnerde eraan dat wanneer gebruikt als een buffer voor celcultuur,HEPES in het kweekmedium dat gedurende meer dan 3 uur aan zichtbaar licht wordt blootgesteld, produceert waterstofperoxide dat giftig is voor de cellen.Het wordt aanbevolen dat het cultuurmedium in het donker wordt bewaard.