HEPES is een belangrijke biochemische voorbereiding in de biochemische industrie. Het wordt beschouwd als om één van de belangrijke buffers op het gebied van biologisch onderzoek. De chemische naam van HEPES is: N-hydroxyethylpiperazine-1-Ethanesulfonic is het zuur, het karakter wit kristallijn poeder, is een zwak zuur, dat vaak als zwitterionic buffer en farmaceutische tussenpersoon in de organische chemische industrie wordt gebruikt. Het wordt vaak geselecteerd als buffer voor celcultuur wegens zijn voordelen:
De plaats en de bufferproducten van Desheng
1. De decompositiecapaciteit van HEPES kan met de verhoging van temperatuur worden verbeterd en met de daling van temperatuur worden verzwakt, maar vergelijkbaar geweest met andere buffers, verandert zijn decompositieconstante niet veel met temperatuur, die HEPES-buffer maakt a-buffer worden die beter de structuur en de functie van het enzym handhaaft. De buffer kan een constante pH waaier voor een langere periode controleren en heeft geen toxisch effect op cellen.
2. PH die voor de meeste cellen wordt vereist is 7.2-7.4, heeft HEPES een goede buffercapaciteit in dit gamma, maar de optimale pH waarde varieert met het gecultiveerde type van cel. De fibroblasten verkiezen hogere pH (7.4-7.7), terwijl subcultured cellenvariëteiten zuurrijke pH vereisen (7.0-7.4). Het meeste cultuurmiddel baseert zich op natriumbicarbonaat (NaHCO3) en Co2-systeem om als buffer op te treden voor. De Co2-concentratie in de gasfase met de natriumbicarbonaatconcentratie in het cultuurmiddel moeten zou worden in evenwicht gebracht. In dit geval, zou kroonkurk van de celcultuur niet moeten worden geschroeft te vast om gasuitwisseling te verzekeren. Nochtans, na opslag voor een bepaalde periode, zal pH van het buffersysteem met de Co2-vervluchtiging stijgen. Op dit ogenblik, wordt de cultuuroplossing snel purper wanneer de cel subcultured en wordt geblazen, makend de cellen die met dit cultuurmiddel moeilijk worden gecultiveerd te overleven. Zelfs als het overleeft, is de activiteit het ook zeer laag, en het proliferatietarief is zeer langzaam. Het toevoegen van HEPES aan de cultuuroplossing kan dit probleem vermijden. HEPES kan als buffer worden gebruikt om bicarbonaat te vervangen om de beperking van het de cultuurmilieu van hoog-concentratieco2 te elimineren. De definitieve gebruikte concentratie van HEPES-buffer is over het algemeen 1025mM.
Hoe te om HEPES te gebruiken:
1. HEPES kan direct aan de voorbereide cultuuroplossing bij de vereiste concentratie worden toegevoegd, en dan door filtratie worden gesteriliseerd. Voeg 2,38 gram van HEPES per 1000ml van cultuuroplossing toe, pas pH aan 7,2 met lNnaoh na aan ontbinding, filter en steriliseer op dit ogenblik en gebruik, is de gebruiksconcentratie van HEPES 10 mmol/L.
2. Het kan ook in 100 x opslagoplossing (l mol/L) worden voorbereid. V3o3or gebruik, wordt 99ml van cultuuroplossing toegevoegd aan de oplossing van de lmlopslag, en de definitieve toepassingsconcentratie is nog van de de voorraadoplossing van 10mmol/L. l mol/L (100 x) HEPES de voorbereidingsmethode: los 23.8g HEPES in 90ml dubbel-gedistilleerd water op, pas pH aan 7.5-8.0 aan met 1N-NaOH, dan verdun aan 100ml met water, filter en steriliseer, en deel flesjes (2ml/bottle), opslag bij 4℃ of -20℃ uit.
Eraan herinnerd Desheng Biochemisch die wanneer gebruikt als buffer voor celcultuur, HEPES in het cultuurmiddel aan zichtbaar licht voor meer dan 3h zal produceren waterstofperoxyde blootstelde die aan de cellen giftig is. Men adviseert dat het cultuurmiddel in dark wordt opgeslagen.
