Toepassing van 4 hydroxyethylpiperazine ethanesulfonic zuur (HEPES) in de opsporing van het hondsdolheidsvirus

4-hydroxyethylpiperazine ethanesulfonsyre, afkorting in het EngelsHEPES-bufferCAS-nummer: 7365-45-9, kleur wit kristallijns poeder, PH-waarde 6,8-8.2De meest voorkomende toepassing is als biologische buffer voor de aanpassing van de pH-waarde en de toepassing ervan in huidverzorgingsproducten wordt ook geliefd door grote fabrikanten.De toepassing ervan bij het opsporen van rabiësvirussen is vaak onbekendVandaag zal de redacteur van Desheng relevante kennis voor iedereen populair maken.

Het hondsdolheidvirus produceert over het algemeen geen cytopathische (CPE) stof wanneer het zich voortplant in geïnfecteerde cellen, en het is niet gemakkelijk om plaques te vormen onder conventionele kweekomstandigheden.Hoewel veel geleerden in binnen- en buitenland hebben vastgesteld dat het hondsdolheidvirus erosie op kippenembryocellen en BHK-21 cellen. Spotmethoden, maar deze methoden vereisen strenge experimentele voorwaarden, of de bewerkingen zijn ingewikkeld en moeilijk te beheersen, wat van invloed is op hun popularisering en gebruik.Nadat de onderzoekers ontdekten dat 4-hydroxyethylpiperazine ethanesulfoninezuur HEPES het pathogene effect van het hondsdolheidvirus op geïnfecteerde cellen kan versterken, gebruikten ze deze eigenschap van HEPES om een eenvoudige en snelle HEPES-plaque-methode voor het hondsdolheidvirus te ontwikkelen.

Het effect van HEPES op de vorming van rabiësvirusplaque

Nadat de geïnfecteerde cellen gedurende 3 tot 5 dagen bij 37°C werden gekweekt, ontwikkelden de met HEPES behandelde geïnfecteerde cellen duidelijke cytopathische veranderingen aan de onderkant van de bekleding.Na het kleuren met kristalvioletIn de HEPES-behandelde celgroep bleek er geen tekenen van plaquevorming te zijn, geen cytopathisch effect en geen plaquevorming.Het is duidelijk dat HEPES de vorming van rabiësvirusplaque op BHK-cellen kan bevorderen..

Opmerking over de gevoeligheid van de HEPES-plactmethode

De HEPES-plaque methode kan worden gebruikt voor de titer van virusinfectie.Experimenten tonen aan dat er een duidelijke titerrelatie bestaat tussen het aantal plaques dat na virusinfectie en virusverdunning wordt gevormd.De infectie titers van dezelfde hondsdolheidvirus CTN-BHK stam werden gemeten met de HEPES plaque methode en de muis methode.De resultaten toonden aan dat het aantal plaques dat met de HEPES-plaque-methode werd verkregen voor 4 opeenvolgende metingen varieerde van.0×10° tot 4.0×10*PFU/m1. De infectietiter verkregen door de muismethode voor 4 opeenvolgende metingen is 6,0×6,8log of 1,0×10°6,3×10/ml.Dit toont aan dat de snelle HEPES-plaque-methode dezelfde gevoeligheid heeft als de muismethode..

Voordelen van de HEPES-plactmethode

Met behulp van rabiesvirus CTN-181 stam en CTN-BNK stam om de infectie titer titratie methode te bestuderen,de resultaten tonen aan dat HEPES het pathogene effect van het hondenvirus op de geïnfecteerde cellen kan induceren en versterkenWanneer het virus de cellen infecteert, worden ze gekweekt bij 37°C voor 3 ̊5 Voeg gewoon 50 ̊00 mmol/L HEPES toe op de dekking van methylcellulose semi-vaste medium op de eerste dag,na 24 uur met een kristalviolette oplossing bevlekken, en het aantal plaques met het blote oog berekenen na het drogen bij kamertemperatuur.Deze plaque methode heeft de voordelen van snel, eenvoudig, economisch, gevoelig en gemakkelijk te beheersen.

De HEPES die door Desheng wordt geproduceerd is reagenskwaliteit met een zuiverheid van meer dan 99%.DeshengAls u vragen of behoeften heeft, kunt u naar de officiële website gaan om de klantenservice te raadplegen.