Wij voegen altijd bufferoplossingen toe wanneer het uitvoeren van DNA-elektroforese. Omvatten de algemeen gebruikte bufferoplossingen TAE, die Tris, acetaat en EDTA, en TBE bevat (tris-boraat-EDTA).
Wat is de rol van de buffer? Één van de functies van de buffer moet pH van de oplossingsstal handhaven. Wanneer een elektrische stroom door water overgaat, komt een oxydatiereactie bij de anode voor om zuurstof en waterstofionen te produceren; een verminderingsreactie komt bij de kathode voor om waterstof en hydroxydeionen te produceren. De elektroforese op lange termijn zal het anodezuur en de kathode alkalisch maken. Een goed buffersysteem zou een sterke buffercapaciteit moeten hebben om pH van de oplossing bij beide fundamenteel stabiele polen te houden. Een andere functie van de elektroforesebuffer is de oplossing te maken een bepaald geleidingsvermogen hebben om de migratie van DNA-molecules te vergemakkelijken. DNA is een alkalische substantie die negatief - geladen tijdens elektroforese (buffer pH=8) is en van de negatieve elektrode aan de positieve elektrode migreert.
Een andere component van de elektroforesebuffer is EDTA, het doel waarvan chelate Mg2+-plasma en de activering van DNase te verhinderen tijdens elektroforese is. Aangezien de nuclease deze ionen vergt, kan het EDTA deze ionen stevig houden om nucleic zure degradatie te vermijden. Maar men zou moeten opmerken dat de magnesiumionen ook cofactoren van vele enzymen, zoals beperkingsenzymen, DNA-polymerase, enz. zijn, zodat is de concentratie van EDTA over het algemeen niet te hoog (gewoonlijk rond 1mM).
Deshengtris buffer verpakking
Zo wat men beter is, TAE of TBE? In feite, welke men zou ik voor DNA-elektroforese moeten gebruiken? Het hangt werkelijk van het doel van uw experiment af. Neem een blik bij het verschil tussen twee.
1. Het geleidingsvermogen van TBE is groter dan dat van TAE. Daarom vergelijkbaar geweest met TAE, zal TBE minder waarschijnlijk het oververhitten in de elektroforesetank veroorzaken. TBE wordt geadviseerd voor elektroforese op lange termijn.
2. Het boorzuur is een enzyminhibitor, zodat als u elektroforesedna voor spijsverteringsreactie moet scheiden, wordt het geadviseerd om TAE als elektroforesebufferoplossing te gebruiken
3. TBE is beter voor het scheiden van kleinere fragmenten. Voor fragmenten kleiner dan 300bp, is de migratiesnelheid in TBE sneller op een 2%-agarose gel.
4. TAE is geschikt voor de scheiding van grote fragmenten. De fragmenten groter dan 2kb migreren sneller in TAE (in 0,8% agarose gel), en de snelheid is sneller over 10% dan in TBE. TAE is geschikter voor terugwinning van DNA-Fragment. Vergeleken met TBE, heeft TAE hogere resolutie voor supercoiled DNA.
Samengevat, kan de kwestie van of TBE of TAE beter zijn niet worden veralgemeend. Het meest geschikte buffersysteem zou volgens het specifieke experimentele doel moeten worden geselecteerd. De biologische die buffer door Desheng wordt ontwikkeld heeft een brede bufferwaaier, en slechts wordt dit soort buffer gebruikt. Het systeem kan buffers met een brede waaier van pH waarden voorbereiden, en kan diverse specificaties verstrekken van verpakking. Koop buffers in Biochemische Desheng, heet om te raadplegen en welkom te kopen.
