De meest gebruikte bufferoplossingen zijn TAE, die Tris, acetaat en EDTA bevat, en TBE (Tris-borate-EDTA).
Een van de functies van de buffer is om de pH van de oplossing stabiel te houden.een oxidatiereactie optreedt aan de anode om zuurstof- en waterstofionen te genererenBij lange termijn electrophoresis wordt het anodezuur en de katode alkalisch.Een goed buffersysteem moet een sterk buffervermogen hebben om de pH van de oplossing aan beide polen vrijwel stabiel te houdenEen andere functie van de buffer voor elektroforese is dat de oplossing een bepaalde geleidbaarheid heeft om de migratie van DNA-moleculen te vergemakkelijken.DNA is een alkalische stof die tijdens elektroforese negatief geladen wordt (buffer pH=8) en van de negatieve elektrode naar de positieve elektrode migreert.
Een ander onderdeel van de buffer voor elektroforese is EDTA, waarvan het doel is om Mg2+ plasma te chelateren en de activering van DNase tijdens elektroforese te voorkomen.EDTA kan deze ionen stevig vasthouden om afbraak van nucleïnezuren te voorkomenHet magnesiumion is echter ook een cofactor van veel enzymen, zoals restrictie-enzymen, DNA-polymerasen, enz.dus de concentratie van EDTA is over het algemeen niet te hoog (meestal rond 1mM).
DeshengTRIS-bufferverpakking
Dus welke is beter, TAE of TBE? In feite, welke moet ik gebruiken voor DNA-elektrophoresis? Het hangt echt af van het doel van je experiment.
1. De geleidbaarheid van TBE is groter dan die van TAE. Daarom is het minder waarschijnlijk dat TBE in vergelijking met TAE oververhitting in de elektroforese tank veroorzaakt.TBE wordt aanbevolen voor lange termijn elektroforese.
2Borinezuur is een enzymremmer, dus als u electrophoresis DNA moet scheiden voor de spijsverteringsreactie, wordt het aanbevolen om TAE te gebruiken als de bufferoplossing voor elektroforese.
3Voor fragmenten kleiner dan 300 bp is de migratiesnelheid in TBE sneller op een 2% agarose gel.
4Fragmenten groter dan 2kb migreren sneller in TAE (in 0,8% agarose gel), en de snelheid is ongeveer 10% sneller dan in TBE.TAE is beter geschikt voor het terugvinden van DNA-fragmenten.In vergelijking met TBE heeft TAE een hogere resolutie voor supergekoeld DNA.
In het kort kan de vraag of TBE of TAE beter is, niet worden gegeneraliseerd.De door Desheng ontwikkelde biologische buffer heeft een breed bufferbereik.Het systeem kan buffers bereiden met een breed scala aan pH-waarden en kan verschillende specificaties van verpakking bieden.welkom om te raadplegen en te kopen.
