Company News About HEPES-lysis bufferCAS7365-45-9 wordt gebruikt om nucleoplasmic proteïne te halen
HEPES is hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonic zuur 4 (n'-a-hydroxythylpiperazine-N'-Ethanesulfanic zuur), een wit kristalpoeder, de buffer van het waterstofion, die een constante pH waaier kan lange tijd controleren. De efficiënte bufferwaaier is pH6.8-8.2. Algemeen gebruikt om eiwitextractielysis buffer, de buffer van de celcultuur, enz. voor te bereiden.
De scheiding constant van HEPES is 7,5. Wanneer zich het equimolar mengen van HEPES en zijn Na-HEPES, is pH van de oplossing 7,5. Over het algemeen, wordt een vaste maalconcentratie van HEPES eerst voorbereid, en dan wordt pH aangepast aan de gespecificeerde waarde met een sterke basis (over het algemeen algemeen gebruikt NaOH). Hier, dient NaOH slechts om OH te verstrekken. Het is ook mogelijk om andere sterke basissen zoals KOH te gebruiken. Wanneer het pH verschil groot is, concentreerde het gebruik NaOH. Voor verfijning, gebruiks verdund NaOH. Als NaOH-het vaste lichaam direct wordt toegevoegd, is de fout te groot, en wanneer NaOH opgeloste Exotherm is en veranderend de temperatuur kan de nauwkeurigheid van de pH elektrode beïnvloeden.
HEPES-lysis buffervoorbereiding:
| Lysis Oplossing A: | Lysis Oplossing B: | ||
| HEPES | 10mmol/L, pH7.9 | HEPES | 20mmol/L, pH7.9 |
| KCl | 10mmol/L | NaCl | 420mmol/L |
| MgCl2 | 1.5mmol/L | MgCl2 | 1.5mmol/L |
| DTT | 1mmol/L | DTT | 0.5mmol/L |
| 甘油 | 5% | glycerine | 25% |
| EDTA | 0.2mmol/L | EDTA | 0.2mmol/L |
| Np-40 | 1% | ||
| PMSF (voeg v3o3or gebruik toe) | 1mmol/L | PMSF (voeg na gebruik toe) | 0.5mmol/L |
| aprotinin | 3mg/L | aprotinin | 5mg/L |
| leupeptin | 3mg/L | leupeptin | 5mg/L |
| pepstainA | 2mg/L | pepstainA | 3mg/L |
Stappen:
1. Verzamel de cellen in een EP-buis en centrifugeer (4000r/min, 5min, 4 graden).
2. Was drie keer met PBS, centrifugeren zoals hierboven, de bovendrijvende substantie verwerp.
3. Voeg 100 μl van buffer A toe, broed op ijs uit voor 10 min, centrifugeer (14000 r/min, 1 min), en verwerp de bovendrijvende substantie.
4. Stel de korrel in 60 microliters van Buffer B opnieuw uit, meng me goed, centrifugeer op ijs voor 30min, centrifugeer (14000r/min, 15min, 0 graad), verzamel de bovendrijvende substantie en verwerp de korrel.
Onder hen, wordt de rol van lysate A hoofdzakelijk gebruikt om cytoplasmic proteïnen vrij te geven en de membraanproteïnen, wordt lysate B gebruikt om kernproteïnen vrij te geven, zijn np-40 zowel een capillair-actieve stof als een detergens, is zijn rol allebei het het (milde) celmembraan, vernietigt en met de vrijgegeven proteïne kan combineren om precipitatie te verhinderen, kunnen het grootste deel zo van de cytoplasmic proteïne en membraanproteïne worden verwijderd nadat de bovendrijvende substantie door centrifugeren in de eerste stap wordt verwijderd. Nadat de kernproteïne wordt gehaald, kan het met lysate A voor 2h worden gedialyseerd en voor IP worden gecombineerd; of verdund met andere oplossingen en vervangen met geconcentreerde centrifugebuizen voor IP of andere experimenten.
De belangrijkste grondstoffen van diagnostischee reagentia de in vitro van Desheng zijn: 1. BIB-BUFFER TRIS, BICINE, HEPES, CAPS, ZWABBERS, KRANEN, EPPS, MOPSO, PIJPEN, FUT; 2. Chemiluminescente reagentialuminol, isoluminol, Acridine ester dmae-NHS, Acridine ester nsp-dmae-NHS, Acridine zoute nsp-SA, Acridine zout nsp-sa-NHS, Acridine hydrazide nsp-sa-ADH, Acridine ester me-dmae-NHS; 3. DE REAGENTIA TOOS, BOVENKANTEN, DRUKTEN, ADPS, ALPEN, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS VAN NIEUWE TRINDER; 4. Het gel van de anti-stralingsscheiding voor de buisadditieven van de bloedinzameling, natriumheparine, lithiumheparine, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, bevordert Stollingsmiddel, coagulatiepoeder enz. Bovendien veroorzaakt het ook de Media en carbomer 940/980 van het Virusvervoer. Welkom vrienden komen kopen.
