HEPES-bufferis 4-hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonsype (N?? -a-hydroxythylpiperazine-N?? -ethanesulfonsype), een wit kristalpoeder, waterstof-ionbuffer, dat gedurende lange tijd een constant pH-bereik kan regelen.Het effectieve bufferbereik is pH 6,8-8.2Meestal gebruikt voor het bereiden van proteïne-extractie-lysisbuffer, celcultuurbuffer, enz.
De dissociatieconstante van HEPES is 7.5Bij gelijkmatig mengen van HEPES en zijn Na-HEPES is de pH van de oplossing 7.5In het algemeen wordt eerst een vaste molarconcentratie HEPES bereid en vervolgens wordt de pH aangepast aan de gespecificeerde waarde met een sterke base (in het algemeen veelgebruikte NaOH).NaOH dient alleen om OH te leveren. Het is ook mogelijk om andere sterke basissen zoals KOH te gebruiken. Wanneer het pH-verschil groot is, gebruik geconcentreerd NaOH. Voor fijne afstemming, gebruik verdund NaOH.de fout is te groot, en wanneer NaOH is opgelost Exotherm en het veranderen van de temperatuur kan de nauwkeurigheid van de pH-elektrode beïnvloeden.
HEPES-lysebufferpreparaat:
| Lyseoplossing A: |
Lyseoplossing B: |
| HEPES |
10 mmol/l, pH7.9 |
HEPES |
20 mmol/l, pH7.9 |
| KCl |
10 mmol/l |
NaCl |
420 mmol/l |
| MgCl2 |
1.5 mmol/l |
MgCl2 |
1.5 mmol/l |
| DTT |
1 mmol/l |
DTT |
0.5 mmol/l |
| 甘油 |
5% |
glycerine |
25% |
| EDTA |
0.2 mmol/l |
EDTA |
0.2 mmol/l |
| NP-40 |
1% |
|
|
| PMSF (voorafgaand aan gebruik toevoegen) |
1 mmol/l |
PMSF (na gebruik toevoegen) |
0.5 mmol/l |
| Aproteinine |
3 mg/l |
Aproteinine |
5 mg/l |
| leupeptine |
3 mg/l |
leupeptine |
5 mg/l |
| Pepstaïne |
2 mg/l |
Pepstaïne |
3 mg/l |
Stapjes:
1De cellen worden in een EP-buis verzameld en gecentrifugeerd (4000 r/min, 5 min, 4 graden).
2Drie keer wassen met PBS, centrifugeer zoals hierboven, gooi de supernatant weg.
3. Voeg 100 μl buffer A toe, incuberen op ijs gedurende 10 min, centrifugeer (14000 r/min, 1 min) en gooi de supernatant weg.
4. Resuspendeer het granulaat in 60 microliter Buffer B, meng het goed, centrifugeer op ijs gedurende 30 minuten, centrifugeer (14000 r/min, 15min, 0 graden), verzamel het supernatant en gooi het granulaat weg.
Onder hen is de rol van lysat A voornamelijk gebruikt om cytoplasmatische eiwitten en membraan eiwitten vrij te geven, lysat B wordt gebruikt om nucleaire eiwitten vrij te geven, NP-40 is zowel een oppervlakteactief middel als een wasmiddel,Het vernietigt het celmembraan (licht), en kan zich combineren met het vrijgekomen eiwit om neerslag te voorkomen,dus het grootste deel van het cytoplasmatische eiwit en membraan eiwit kan worden verwijderd nadat de supernatant is verwijderd door middel van centrifugatie in de eerste stapNa het extraheren van het nucleaire eiwit kan het gedurende 2 uur met lysat A dialyseren en voor IP worden gecombineerd;of verdund met andere oplossingen en vervangen door geconcentreerde centrifugebuizen voor IP- of andere proeven.
De belangrijkste grondstoffen van de in vitro diagnostische reagentia van Desheng zijn: 1.Biologische buffer Tris, BICINE, HEPES, CAPS, MOPS, TAPS, EPPS, MOPSO, PIPES, PEP; 2. Chemiluminescerende reagentia luminol, isoluminol, acridieneester DMAE-NHS, acridieneester NSP-DMAE-NHS, acridiensalt NSP-SA,Acridinezout NSP-SA-NHS, acridienhydrazide NSP-SA-ADH, acridieneester ME-DMAE-NHS; 3. de reagentia van New Trinder: TOOS, TOPS, ADOS, ADPS, ALPS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS; 4.Anti-bestraalingsseparatiegel voor additieven voor bloedinzamelbuizen, natriumheparine, lithiumheparine, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, bevorderen stollingsmiddel, stollingspoeder, enz. Bovendien produceert het ook Virus Transport Media en carbomeer 940/980.Welkom vrienden om te komen kopen.
Uw bericht moet tussen de 20-3.000 tekens bevatten!