Hoe gaat recombinante glycerolkinase om met detectie-interferentie?

Triglyceriden (TG) zijn een belangrijk onderdeel van bloedlipiden, en hun concentratiewaarden zijn belangrijke indicatoren voor het beoordelen van het risico op hart- en vaatziekten. Jarenlang was de klinische detectie van triglyceriden voornamelijk gebaseerd op enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits. Een van de kernenzymen in deze methode, glycerolkinase (GK), is verantwoordelijk voor het katalyseren van de generatie van glycerol-3-fosfaat uit glycerol, het initiëren van een reeks enzymatische reacties en uiteindelijk het bepalen van het TG-gehalte door middel van fotometrie. Traditionele natuurlijke bronnen van glycerolkinase gaan echter vaak gepaard met interfererende enzymen zoals NADH-oxidase en catalase, die reactiesubstraten kunnen verbruiken of nevenreacties kunnen produceren, wat resulteert in grote afwijkingen en een slechte reproduceerbaarheid van de detectieresultaten. Geconfronteerd met de pijnpunten in deze industrie, is recombinant glycerolkinase opgedoken, wat klinische tests naar een nieuw tijdperk van precisie leidt met zijn hoge zuiverheid en lage interferentie-eigenschappen.

1, Interferentie-enzymprobleem: de "onzichtbare moordenaar" van traditionele detectie

In het proces van enzyme-linked immunosorbent assay voor het detecteren van triglyceriden, moet glycerolkinase synergetisch samenwerken met glycerofosfaatoxidase, peroxidase en andere enzymen om chromogene stoffen te produceren via de Trinder-reactie. Als de glycerolkinase-bereiding echter NADH-oxidase bevat, zal dit niet-specifiek NADH (gereduceerd co-enzym I) afbreken, wat resulteert in een afname van de absorptie; Als catalase aanwezig is, zal het het waterstofperoxide dat in de reactie wordt gegenereerd, afbreken, waardoor de kleurintensiteit afneemt. De aanwezigheid van deze twee interfererende enzymen kan in milde gevallen afwijkingen van de standaardcurve veroorzaken en in ernstige gevallen de detectieresultaten volledig ongeldig maken. Natuurlijke bronnen van glycerolkinasen (zoals die geëxtraheerd uit bacteriën of schimmels) zijn vaak moeilijk volledig te verwijderen vanwege hun complexe extractieprocessen en zuiveringsmoeilijkheden, waardoor ze een knelpunt vormen dat de detectienauwkeurigheid beperkt.

2, Recombinant technologie: zuiveren uit de bron en 'pure enzymen' creëren

De doorbraak in recombinant DNA-technologie heeft revolutionaire veranderingen teweeggebracht in de productie van glycerolkinasen. Door het glycerolkinase-gen in te brengen in engineeringbacteriën zoals Escherichia coli en de expressieomstandigheden te optimaliseren, kan recombinant glycerolkinase een efficiënte en controleerbare expressie bereiken. Belangrijker nog, het recombinante productiesysteem vermijdt het naast elkaar bestaan van meerdere enzymen in natuurlijke stammen, en daaropvolgende precisiezuiveringsprocessen zoals chromatografie en ultrafiltratie kunnen interfererende componenten zoals NADH-oxidase en catalase effectief verwijderen. De zuiverheid van recombinant glycerolkinase is meer dan 95%, wat veel hoger is dan die van natuurlijke enzympreparaten, waardoor het pad van interfererende enzymverontreiniging uit de bron wordt afgesneden.

3, Stabiliteitsverbetering: wetenschappelijke reactie op temperatuurgevoeligheidsproblemen

Hoewel recombinant glycerolkinase aanzienlijke voordelen heeft in zuiverheid, is de stabiliteit in omgevingen boven 45 ℃ slecht, wat ooit een van de obstakels was voor de wijdverbreide toepassing ervan. Door eiwittechnische modificaties zoals site-directed mutagenese en rationeel ontwerp, hebben onderzoekers met succes de thermische stabiliteit van enzymen verbeterd. Tegelijkertijd heeft het optimaliseren van het buffersysteem en de combinatie van beschermende middelen in de formulering (met aandacht voor het vermijden van de negatieve effecten van trehalose) de opslagtijd en gebruiksduur van de enzymactiviteit verder verlengd. Tegenwoordig kan hoogwaardig recombinant glycerolkinase de activiteit lange tijd op 4 ℃ behouden en robuust presteren onder detectieomstandigheden bij kamertemperatuur, volledig voldoend aan de opslag- en bedieningsvereisten van de reagenskit.

Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. heeft zich altijd gehouden aan de productie- en bedrijfsfilosofie van "kwaliteit eerst, technologisch leiderschap" en "innovatie en streven naar excellentie", en voortdurend onderzoek gedaan naar en ontwikkeling van reagentia die nodig zijn in het diagnostische veld. Sinds de oprichting in 2005 heeft het een geschiedenis van bijna 20 jaar en wordt het diepgaand vertrouwd en ondersteund door gebruikers. De diagnostische enzymreagentia die onafhankelijk door Desheng zijn ontwikkeld en geproduceerd, zijn verkocht aan verschillende delen van de wereld. Als u in de nabije toekomst gerelateerde inkoopbehoeften heeft, neem dan gerust contact met ons op!