Is glycerolkinase-activiteit gevoelig voor inactivatie? Mis deze details niet!

Glycerolkinase, als een belangrijke enzympreparaat dat het glycerolmetabolisme katalyseert, heeft aanzienlijke waarde in biochemisch onderzoek, klinische diagnose en industriële productie. Vanwege zijn eiwiteigenschappen wordt de enzymactiviteit gemakkelijk beïnvloed door verschillende omgevingsfactoren. Het begrijpen van deze invloedsfactoren en het nemen van bijbehorende onderhoudsmaatregelen is van groot belang voor het waarborgen van de nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid van experimentele resultaten.

1, Het effect van temperatuur op glycerolkinase-activiteit

Glycerolkinase ondergaat snel onomkeerbare denaturatie en inactivatie boven 60 ℃, en de driedimensionale structuur verandert permanent, waardoor de katalytische functie verloren gaat. Daarom moet het enzympreparaat tijdens experimentele handelingen altijd in een ijsbad (0-4 ℃) worden geplaatst; Opslag op korte termijn wordt aanbevolen in een koelkast bij 4-8 ℃; Langdurige opslag moet worden uitgevoerd in een omgeving van -20 ℃ of -80 ℃; Herhaaldelijk invriezen en ontdooien vermijden, het wordt aanbevolen om op te slaan na verpakking.

2, Het effect van pH-waarde op glycerolkinase-activiteit

Het actieve centrum van het enzym is zeer gevoelig voor de concentratie van waterstofionen. Extreme pH-omstandigheden (te zuur of te alkalisch) kunnen de ladingsverdeling en ruimtelijke structuur van enzymaiwitten verstoren, wat leidt tot onomkeerbare inactivatie. In de buurt van het iso-elektrische punt zullen enzymmoleculen neerslaan, hoewel deze neerslag soms opnieuw kan worden opgelost door de pH aan te passen, kan dit gepaard gaan met verlies van activiteit.

Bij het uitvoeren van experimenten met glycerolkinase worden gespecialiseerde bufferoplossingen (zoals Tris HCl, HEPES, enz.) gebruikt voor reconstitutie en verdunning; Vermijd het gebruik van puur water of oplossingen zonder buffercapaciteit om enzympreparaten direct op te lossen; Handhaaf de pH van het reactiesysteem binnen het optimale bereik van het enzym; Kalibreer de pH-meter regelmatig om nauwkeurige metingen te garanderen.

3, Het effect van schuifkracht op glycerolkinase-activiteit

Mechanische effecten zijn ook vaak over het hoofd geziene invloedsfactoren. Intensief roeren, vortexoscillatie of snel blazen kan sterke schuifkrachten genereren, waardoor de ruimtelijke structuur van enzymmoleculen wordt verstoord en denaturatie en inactivatie optreden, wat vaak onomkeerbaar is. Bij het mengen moet een zachte blaasmethode worden gebruikt; U kunt een pipet gebruiken om langzaam en herhaaldelijk te blazen, op te zuigen en goed te mengen; Vermijd het gebruik van gewelddadige mengapparatuur zoals vortexoscillatoren; Voor enzympreparaten die bijzonder gevoelig zijn voor schuifkrachten, kan het mengen worden gedaan door de centrifugebuis langzaam om te keren.

4, Het effect van zoutionenconcentratie op glycerolkinase-activiteit

De normale werking van enzymen vereist een geschikte ionische omgeving, en directe oplossing met puur water plaatst het enzym in een lage osmotische omgeving, waardoor veranderingen in structurele hydratatie ontstaan en deactivering optreedt. Ondertussen kan het gebrek aan noodzakelijke hulpfactoren zoals magnesiumionen ook de enzymactiviteit beïnvloeden. Daarom wordt de meegeleverde gespecialiseerde bufferoplossing gebruikt voor reconstitutie; Zorg ervoor dat de buffer de nodige zoutionen bevat voor stabiele enzymactiviteit; Voeg de nodige hulpfactoren toe volgens de instructies.

5, De invloed van andere factoren op glycerolkinase-activiteit

Naast de hierboven genoemde belangrijkste factoren zijn er nog een aantal andere aspecten die moeten worden opgemerkt: qua opslagtijd zal de enzymactiviteit, zelfs onder optimale opslagomstandigheden, langzaam afnemen in de loop van de tijd; Qua eiwitconcentratie kan overmatige verdunning de enzymstabiliteit beïnvloeden; Qua oxidatie zijn bepaalde enzymen gevoelig voor oxidatie en vereisen ze de toevoeging van reductiemiddelen ter bescherming; Microbiële contaminatie kan leiden tot enzymatische inactivatie. Het wordt aanbevolen om de opslagtijd van enzympreparaten in voorraad regelmatig te controleren; Vermijd overmatige verdunning van enzympreparaten; Enzymen die gevoelig zijn voor oxidatie moeten worden aangevuld met een geschikte hoeveelheid DTT of β - mercapto-ethanol; Houd de experimentele omgeving schoon en vermijd microbiële contaminatie.

Om de betrouwbaarheid van de experimentele resultaten te waarborgen, wordt aanbevolen de volgende werkprocedures te volgen: lees de producthandleiding zorgvuldig door vóór het experiment; Bereid alle reagentia en instrumenten voor voordat u het enzympreparaat eruit haalt; Volg strikt de aanbevolen bedrijfstemperatuur voor het experiment; Gebruik vers bereide buffer- en reactiereagentia; Stel geschikte positieve en negatieve controles in; Gedetailleerde registratie van experimentele omstandigheden en methoden.

Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. heeft een professioneel enzympreparaatteam opgericht om enzympreparaten te ontwikkelen en te produceren die geschikt zijn voor in-vitro diagnostische reagentia en andere gebieden. Momenteel omvatten de enzympreparaten die te koop zijn glycerolkinase, uricaase, lactaatdehydrogenase, creatinekinase, enz. Als u in de nabije toekomst aankoopbehoeften heeft, aarzel dan niet om te informeren!