Wordt de abnormale PCR versterkingskromme veroorzaakt door de media van het virusvervoer?

In de nucleic zuuropsporing van nieuwe coronavirus, is de zeer belangrijkste technologie het fluorescente kwantitatieve PCR experiment in real time van nucleic zuur, dat de kerntechnologie van de nieuwe coronavirusopsporing is. Zo welk effect die vervoert het virus media voor de verbindingen van de virusbemonstering heeft worden gebruikt op de PCR versterking van nucleic zuren? Dit artikel maakt een korte bespreking.

Vervoert het virus media beïnvloedt nucleic zuurpcr versterking?

Het beoordelen van het resultaat van de PCR versterkingskromme:

Het fluorescente kwantitatieve PCR instrument in de nieuwe kroonopsporing is een routinemateriaal voor moleculair biologieonderzoek geworden. De snelle ontwikkeling van deze opsporingsmethode en de urgentie van de opsporingstaak hebben ook hogere eisen ten aanzien van het opsporingspersoneel naar voren gebracht, die bekwaam hen vereisen om te zijn in het beoordelen van de resultaten van de gegevens. Voor het oordeel van het resultaat van fluorescentie kwantitatieve PCR, moet het meest intuïtieve oordeel zien of de versterkingskromme normaal is. In normale experimenten, zult u problemen met abnormale versterkingskrommen, zoals voorzien versterkingskrommen, slechte herhaalbaarheid tussen veelvoudige putten, en opgetilde versterkingskrommen van negatieve steekproeven ontmoeten.

De redenen voor abnormale PCR versterking buigen:

1. Bevestig of de softwaremontages correct zijn. Controleer de uitrustingsinstructies om te controleren of de tijd, de temperatuur, het cyclusaantal, de fluorescentieinzameling, enz. correct worden geplaatst, en of de geselecteerde reagens ROX als verwijzings fluorescente kleurstof bevat. Sommige resultaten tonen aan dat de versterkingskromme van de grafiek met meerdere componenten niet wordt opgetild, die duidelijk een negatieve steekproef is, maar de kromme van de versterkingsgrafiek wordt opgetild, zodat het de drempellijn, kruist en in plaats daarvan een CT waarde heeft. Dit is omdat de software een fout in de automatische conclusie van de basislijn maakt. De methode om de basislijn manueel aan te passen kan normaal zijn door de basislijn opnieuw te definiëren.

2. Zorg ervoor dat de verbruiksgoederen en de instrumententoebehoren correct worden gebruikt. De verbruiksgoederen zijn belangrijker voor PCR in real time. Vele abnormale versterkingskrommen worden veroorzaakt door ongepast gebruik van verbruiksgoederen.

3. Om te bepalen of de gebruikte reagentia normaal zijn, bepaal eerst of de reagentia efficiënt zijn, met inbegrip van het controleren of de reagentia binnen de geldigheidsperiode zijn, of zij herhaaldelijk bevroren en ontdooid vaak zijn, en of de vervoersvoorwaarden normaal zijn. Als alle bovengenoemd normaal is, dan moet u overwegen of er om het even welke achteloosheid in de verrichtingsdetails is.

Van de bovengenoemde punten, kan men zien dat de media van het virusvervoer direct niet de versterkingskromme zullen beïnvloeden, zal het slechts de virussteekproeven beïnvloeden, maar dit kan door een controleexperiment met positieve steekproeven worden gedaan bepalen of de oplossing van het virusbehoud een invloed op de virussteekproeven. heeft. Er zijn twee types van Desheng-de media van het virusvervoer, zowel zijn het buiten werking gestelde type als het geactiveerde type geschikt voor nucleic zuurpcr experimenten.