Bij het verwante biochemische testen van enzympreparaten, naast het meten van de inhoud, de concentratie, en de stabiliteit van diverse te testen indicatoren, zijn er ook indicatoren voor het ontdekken van enzymactiviteit, zoals bloedsuiker, bloedlipiden, en creatinine. Voor indicatoren zoals transaminase en sarcosine oxydase, moet de enzymactiviteit worden gemeten.
In het algemeen, is de enzymactiviteit de activiteit van enzymkatalyse, die een kinetische parameter van enzym-Michaelis constante Km impliceert, wat de concentratie van het substraat (s) betekent wanneer de enzymatische reactie de helft van de maximumsnelheid bereikt (Vm). De snelheid van de enzymreactie is eenvormig, niet niet lineair als de concentratie, maar het aantal meters in Changshu is constant, wat een kenmerkende fysieke hoeveelheid van het enzym is. Michaelis constant van het enzym verandert met het gemeten substraattype, de reactietemperatuur, pH en de Ionische sterkte. In dezelfde omstandigheden, geen kwestie wat de concentratie van het enzym is, is de concentratie van het vereiste substraat hetzelfde wanneer het maximumreactietarief wordt bereikt.
Meetmethode van Michaelis constant van sarcosine oxydase:
Bereid een sarcosine oplossing met een concentratie van 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10.0mmo1/L met buffer tris-HC1 van pH 8,0 voor, en reageer bij 37°C 5 minuten bepalen de aanvankelijke oxydatieactiviteit van SOX bij verschillende sarcosine concentraties. Het reactietarief V en 1/V wordt verkregen. Volgens de lineweaver-Burk dubbele wederkerige afbeeldingsmethode, met 1 [s] als abscis en 1/V als ordinaat, werden Km en Vmax van SOX aan sarcosine berekend.
Conclusie van Michaelis constant van sarcosine oxydase:
De Michaelis-constante kan worden gebruikt om de specificiteit van het enzym te beoordelen. Kleiner de Km-waarde, groter zijn de affiniteit tussen het enzym en het substraat, en geschikter het substraat als natuurlijk substraat van het enzym. Volgens de test en de berekening van sarcosine oxydase hierboven, is de Michaelis-vergelijking y=1232.5X+8.7012 en de correlatiecoëfficiënt is 0,9947: de berekende waarden van Km en Vmax-van SOX aan sarcosine zijn 141.6mmol/L en 0.115mmol, respectievelijk/(L.min).
Men zou moeten opmerken dat sarcosine de oxydase SOX uit verschillende bronnen een bepaald verschil in Michaelis constant van sarcosine heeft. Bijvoorbeeld, is de Km-waarde van SOX van Corynebaclerium aan sarcosine 21mmol/L. Aangezien de Michaelis-constante niets heeft met de concentratie van het enzym en het type van enzym te doen, kan dit punt ook voor enzymidentificatie of bepaling worden gebruikt. Verstrekt de Desheng Biochemische nadruk op het gebied van biochemische opsporing, en een verscheidenheid van enzympreparaten met inbegrip van SOX, cholesterolesterase, glucoseoxydase, enz.
