Optimalisering van BOVENKANTENmethode voor Bepaling van Vrije Vetzuren

Voor de bepaling van vrije vetzuren in serum of plasma wordt gewoonlijk gebruik gemaakt van de Trinder-chromogeenenzymfotometrische methode.de opsporing van vetzuren wordt beïnvloed door vele factoren, en de detectiemethode moet worden geoptimaliseerd en verbeterd om de nauwkeurigheid van de detectie te verbeteren.

Trinderchromogeen detectie FFA-beginsel:

De detectiemethode bestaat uit drie reactiestappen: vrije vetzuren (FFA of NEFA) reageren met overtollig CoA om acyl-CoA te genereren onder werking van acetyl-CoA-synthase (ACS),en reageert met zuurstof onder werking van acetyl-CoA oxidase (ACO)De reactie genereert 2,3-trans-enoyl CoA en waterstofperoxide, en de Trinder-reactie wordt gebruikt om waterstofperoxide te detecteren, en het gehalte aan FFA kan worden verkregen.

TOPS wordt aanbevolen voor de bepaling van FFA van chromogeen

Problemen in de bepaling en optimalisatie van FFA-methoden:

1Overmatig co-enzym A in de reactie zal de reactie van waterstofperoxide en Trinderchromogeen verstoren, waardoor het totale testresultaat laag wordt.N-ethylmaleimide (NEM) kan worden gebruikt om overtollig co-enzym A te verwijderen.De stabiliteit van NEM is erg aangetast.

2De gebruikte acetyl CoA-synthetase en acetyl CoA-oxidase hebben verschillende substraatspecificiteiten voor verschillende vrije vetzuren, wat verschillen in de bepaling van de resultaten veroorzaakt.Verschillende enzymbronnen hebben verschillende substraatspecificiteiten voor vrije vetzuren met verschillende C-ketenlengtesEr zijn 6 soorten FFA in het menselijk serum, en alleen enzymen met een hoge specificiteit voor hen kunnen geen verschil maken in de meetresultaten.

3De kleur van de op de markt gemeten FFA is MEHA, TBHB, TOOS, enz., maar wordt sterk beïnvloed door CoA,En het moet overdreven zijn., dus interferentie is vereist. Minder chromogeen. SCEP wordt niet geïnterfereerd door co-enzym A, maar is onstabiel. ADOS en TOPS worden minder geïnterfereerd door CoA, en TOPS heeft een hogere molaire absorptiecoëfficiënt,dus het is een beter chromogeen substraat.

4. Voeg sulfhydrylcomplex DTNB en MIT toe om de hoeveelheid NEM te verminderen. De sulfhydrylgroep van DTNM kan reageren met de sulfhydrylgroep van CoA om de interferentie met chromogeen te verwijderen.Een kleine hoeveelheid MIT kan de sulfhydrylgroep van CoA verwijderen en fungeert ook als conserveermiddelOp basis van het gebruik van TOPS-chromogeen kan de interferentie van CoA volledig worden geëlimineerd en is de stabiliteit sterk verbeterd.

Als u hogere eisen stelt aan de resultaten van de FFA-bepaling, kunt u op basis van de bovenstaande punten een kit van betere kwaliteit kiezen.Desheng produceert de grondstoffen voor de FFA- en andere indexbepalingskitsAls TOPS wordt gebruikt om FFA rechtstreeks te bepalen, wordt het, wegens de slechte stabiliteit van de oplossing, aanbevolen een werkoplossing voor onmiddellijk gebruik voor te bereiden vóór gebruik.