Redenen voor de hoge achtergrond van het nieuwe Trinder's reagens TODB

Bij het gebruik van de nieuwe Trinder-reagens TODB, is een hoge achtergrond een veelvoorkomend probleem dat de detectieresultaten beïnvloedt, terwijl onvoldoende afdichting en onvolledig platen wassen belangrijke factoren zijn die gemakkelijk over het hoofd worden gezien tijdens de operatie. Deze twee problemen kunnen een abnormale toename van de achtergrondkleur veroorzaken als gevolg van niet-specifieke binding en interferentie van reststoffen. Hieronder volgt een gedetailleerde analyse en oplossing.

Onvoldoende sluiting: de 'achter de schermen' drijvende kracht achter niet-specifieke combinaties

De functie van de blokkeerstap is om de niet-bindende plaatsen op het oppervlak van de reactiedrager (zoals een ELISA-plaat) te blokkeren. Als de afdichting onvoldoende is, zullen de substraten, enzymconjugaten en andere componenten in de TODB-reagens willekeurig adsorberen op het oppervlak van de drager, waardoor een kleursignaal wordt gevormd zonder de deelname van de doelstof, wat de achtergrondwaarde direct verhoogt.

specifieke reden

1. Onvoldoende afdichtingstijd: Over het algemeen vereist afdichting een verblijf van 60 minuten bij 37 ℃ of 120 minuten bij kamertemperatuur. Als de tijd wordt verkort tot minder dan 30 minuten, kunnen de actieve plaatsen op het oppervlak van de drager niet volledig worden bedekt door de blokkerende oplossing (zoals BSA, magere melkpoeder), en zullen die hydrofobe gebieden die niet zijn geblokkeerd actief eiwitcomponenten in het TODB-reactiesysteem adsorberen, wat resulteert in achtergrondkleuring.

2. Te lage concentratie van blokkerende oplossing: Wanneer de effectieve ingrediënten in de blokkerende oplossing onvoldoende zijn, zoals wanneer de oorspronkelijke 5% BSA daalt tot 1%, kan er geen strakke beschermende film worden gevormd tussen de moleculen. Componenten zoals mierikswortelperoxidase in TODB-reagens zullen zich hechten aan de binnenwand van de plaatporie door hydrofobe interacties, en niet-specifieke reacties zullen optreden met het substraat tijdens de reactie.

3. Falen van de afdichtingsoplossing: Als de afdichtingsoplossing herhaaldelijk wordt bevroren en ontdooid, of langer dan de vervaldatum wordt bewaard, zullen de eiwitcomponenten erin verslechteren en hun afdichtingsfunctie verliezen, wat resulteert in veel "blootgestelde" plaatsen op het oppervlak van de drager, die de bron worden van achtergrondsignalen.

Onvolledig platen wassen: het "stapel effect" van reststoffen

De belangrijkste functie van platen wassen is het verwijderen van ongebonden vrije reagentia (zoals ongebonden antilichamen, TODB-precursorstoffen). Als het platen wassen niet grondig is, zullen reststoffen blijven deelnemen aan de kleurontwikkeling in volgende reacties, waardoor achtergrondinterferentie zich kan ophopen.

Specifieke reden

1. Te weinig platen wassen: Conventioneel testen vereist het wassen van de plaat 3-5 keer. Als het wordt verminderd tot minder dan 2 keer, kunnen de resterende vrije enzymcomplexen in de put niet volledig worden verwijderd, en zal de reactie reageren met het TODB-substraat, wat resulteert in extra kleurontwikkeling.

2. Te veel detergentresten: Na het wassen van de plaat, als de gaten niet op absorberend papier worden omgekeerd en droog worden getampt, zullen er meer detergentresten in elk gat zitten, en sommige componenten daarin zullen het evenwicht van het TODB-reactiesysteem verstoren. Tegelijkertijd zullen resterende enzymconjugaten met de vloeistof in de aangrenzende gaten diffunderen, waardoor kruisbesmetting ontstaat en de achtergrond wordt verhoogd.

3. Er is een probleem met de wasmachine: Wanneer de naald van de wasmachine geblokkeerd is of de druk onvoldoende is, worden de hoeken van de plaatgaten gebieden die niet kunnen worden gewassen. De resterende TODB-reagens zal na het drogen kristalliseren en deelnemen aan de reactie wanneer het opnieuw wordt opgelost, waardoor de lokale achtergrondkleur donkerder wordt.

Samenvatting: Operationele details bepalen de effectiviteit van achtergrondcontrole

Hoewel afdichting en platen wassen routinematige stappen zijn, beïnvloedt hun kwaliteit direct het achtergrondniveau van TODB-reagentia. In de praktijk wordt aanbevolen om de methode van "verlenging van de afdichtingstijd + verhoging van het aantal platen wassingen" toe te passen, in combinatie met maatregelen zoals het controleren van de concentratie van de afdichtingsoplossing en het regelmatig kalibreren van de wasmachine, wat de achtergrondwaarde aanzienlijk kan verminderen en de nauwkeurigheid van de detectieresultaten kan garanderen.

Desheng is gespecialiseerd in de productie van meer dan tien nieuwe Trinder-reagentia, waaronder TODB. Na meer dan tien jaar onderzoek en ontwikkeling kan het ervoor zorgen dat TODB verschijnt als een poeder met een zuiverheid tot 99,5%, sterke wateroplosbaarheid en stabiele prestaties om de nauwkeurigheid van de experimentele resultaten te garanderen. Desheng heeft een plaats op de markt voor in-vitro diagnostische kitgrondstoffen met hoogwaardige producten en wordt diep vertrouwd en ondersteund door klanten in binnen- en buitenland. Als u relevante intenties heeft, klik dan op de officiële website voor overleg!