De volledige naam van HEPES is 4 hydroxyethylpiperazine ethanesulfonic zuur, is CAS 7365-45-9, wordt HEPES vaak gebruikt in biologische buffers, pH bufferwaaier: 6.8-8.2, is het belangrijkste onderdeel van hepesbuffer hydroxyethylpiperazine ethylzwavelzuur, is HEPES een amfotere buffer, die oplosbaar in water is en geen stabiele complexen met metaalionen vormt. Het heeft een goede buffercapaciteit in de pH waaier van 7.2-7.4. Het wordt meestal gebruikt in biochemische kenmerkende uitrustingen, DNA/RNA-extractieuitrustingen en PCR kenmerkende uitrustingen.
Gebruikt in een verscheidenheid van biochemische reacties:
1. HEPES-de buffer wordt vaak gebruikt als bufferreagens in het middel van de celcultuur van diverse types van organismen, cel-cel adhesie, celsamenvoeging en cultuur op korte termijn, en buffer voor het schoonmaken van weefsels en cellen;
2. In eiwitonderzoek, wordt de PIJPEN vaak gebruikt als component en eluent van de bindende buffer in de chromatografie van de kationenuitwisseling;
3. In DNA-onderzoek, wordt de PIJPEN gebruikt als buffer voor calciumfosfaat en DNA-precipitaatvormingssysteem, en als buffer voor de experimenten van AFM en electroporation.
4. Bovendien heeft HEPES een bepaalde interferentie aan de reactie tussen de enzymen van DNA en van de beperking, en het is niet geschikt voor de methode van Lowry om eiwitgehalte te bepalen.
5. HEPES-de buffer wordt vaak gebruikt in het onderzoek van organellen en hoogst veranderlijke, pH-gevoelige proteïnen en enzymen, evenals biochemische kenmerkende uitrustingen, DNA/RNA-extractieuitrustingen en PCR kenmerkende uitrustingen.
6. De reactiebuffer, pre-kruisingsbuffer, en kruisingsbuffer voor het scheiden van en het analyseren van RNA kerncomponenten; gebruikt voor RNA en T4RNA. De moleculaire biologierang wordt gebruikt om 3 ' te etiketteren - eind van RNA met T4-RNAligase, de componenten van de reactiebuffer, pre-kruisingsbuffer en kruisingsbuffer van kernrna te scheiden en te analyseren.
HEPES verwante kwesties
1. PH voor de meeste cellen wordt vereist is 7.2-7.4, maar aangewezen pH voor celcultuur varieert met de types van cellen die beschaafd zijn die. De fibroblasten verkiezen hogere pH (7.4-7.7), terwijl de passage van omgezette cellenvariëteiten zuurheid vereist. pH (7.0-7.4). Aangezien de meeste cultuurvloeistoffen door het systeem van natriumbicarbonaat (NaHCO3) en Co2 als buffer op voor zijn getreden voor, zou de Co2-concentratie in de gasfase in evenwicht met de natriumbicarbonaatconcentratie in de cultuurvloeistof moeten zijn. Als de Co2-concentratie in de gasfase of in de incubatorlucht bij 5% wordt geplaatst, is wordt toegevoegd de hoeveelheid NaHCO3 in de cultuuroplossing 1.97g/L die; als de Co2-concentratie bij 10% wordt gehandhaafd, is wordt toegevoegd de hoeveelheid NaHCO3 in de cultuuroplossing 3.95g/L. die. Kroonkurk van de celcultuur niet moeten zou worden geschroeft te strak om gasuitwisseling te verzekeren;
2. De pH waarde van de cultuuroplossing die de bufferpaar gebruiken van HCO3 en Co2-is onstabiel en neigt alkalisch te zijn na opslag voor een bepaalde periode. Als pH van de cultuur vloeibare veranderingen te snel, HEPES-buffer aan de cultuurvloeistof aan een definitieve concentratie van 1025mM kan worden toegevoegd;
3. HEPES is een amfotere die buffer, meestal in biologisch onderzoek zoals oxydatieve phosphorylation, eiwitsynthese in een steriel milieu, fotosynthetische phosphorylation, Co2-bevestiging, enz. wordt gebruikt; HEPES heeft geen effect op de substraten van metaalionase en is geschikt voor transmissie in elektronenmicroscopie (TEM); in de media van de celcultuur, is het voordeel dat het een vrij constante pH waarde tijdens open cultuur of celobservatie kan handhaven. HEPES (25mM) kan als substituut voor bicarbonaatbuffer, of als Toevoeging van bicarbonaatbuffer (1015mM) worden gebruikt om de beperking van de cultuurmilieu van hoog-concentratieco2 te verlichten. Opgeloste Co2 en het bicarbonaat zijn ook zeer belangrijk voor de goede celgroei.
