Wanneer zou u een Hepes-buffer gebruiken?

De volledige naam vanHEPES-bufferis 4-hydroxyethylpiperazine ethanesulfonzuur, CAS is 7365-45-9, HEPES wordt vaak gebruikt in biologische buffers, pH bufferbereik: 6,8-8.2Het belangrijkste bestanddeel van het hepes-buffer is hydroxyethylpiperazine ethyl zwavelzuur, HEPES is een amfoterisch buffer, dat in water oplosbaar is en geen stabiele complexen met metaalionen vormt.Het heeft een goede buffercapaciteit in het pH-bereik van 7.2-7.4Het wordt voornamelijk gebruikt in biochemische diagnostische kits, DNA/RNA extractie kits en PCR diagnostische kits.

Gebruikt in een verscheidenheid aan biochemische reacties:

1. HEPESbufferwordt vaak gebruikt als bufferreagens in celcultuurmedium van verschillende soorten organismen, voor cel-cel-adhesie, voor kortetermijncelaggregatie en -cultuur, en als buffer voor het reinigen van weefsels en cellen;

2In het onderzoek naar eiwitten wordt PIPES vaak gebruikt als onderdeel en eluent van de bindbuffer in de kationenuitwisselingschromatografie.

3In DNA-onderzoek wordt PIPES gebruikt als buffer voor calciumfosfaat en DNA-vervalvorming en als buffer voor AFM en elektroporatie-experimenten.

4Bovendien heeft HEPES een zekere interferentie met de reactie tussen DNA en restrictieenzymen en is het niet geschikt voor de methode van Lowry om het eiwitgehalte te bepalen.

5. Het HEPES-buffer wordt vaak gebruikt bij het onderzoek naar organellen en zeer variabele, pH-gevoelige eiwitten en enzymen, evenals bij biochemische diagnostische kits,DNA/RNA-extractie- sets en PCR-diagnostische kits.

6. De reactiebuffer, pre-hybrideringsbuffer en hybrideringsbuffer voor het scheiden en analyseren van RNA nucleaire componenten; gebruikt voor RNA en T4RNA.Moleculaire biologie graad wordt gebruikt om de 3'-eind van RNA met T4 RNA ligase te labelen, scheiden en analyseren van de componenten van de reactiebuffer, de prehybride buffer en de hybride buffer van nucleair RNA.

HEPES-poeder

HEPES-gerelateerde kwesties

1De vereiste pH voor de meeste cellen is 7,2-7.4Fibroblasten geven de voorkeur aan een hogere pH (7,4-7,7), terwijl de passage van getransformeerde cellijnen zuurgraad vereist.0-7.4) Aangezien de meeste kweekvloeistoffen worden gebufferd door het systeem van natriumbicarbonaat (NaHCO3) en CO2,de CO2-concentratie in de gasfase moet in evenwicht zijn met de natriumbicarbonaatconcentratie in de kweekvloeistofAls de CO2-concentratie in de gasfase of in de incubatorlucht op 5% wordt ingesteld, bedraagt de hoeveelheid NaHCO3 die in de kweekoplossing wordt toegevoegd 1,97 g/l; als de CO2-concentratie op 10% wordt gehandhaafd,de hoeveelheid toegevoegde NaHCO3 in de kweekoplossing is 3.95 g/l. De dop van de celcultuurfles mag niet te strak worden geschroefd om de gasuitwisseling te waarborgen;

2De pH-waarde van de kweekoplossing met behulp van het bufferpaar HCO3 en CO2 is onstabiel en heeft de neiging alkalisch te zijn na opslag gedurende een bepaalde periode.Als de pH van de kweekvloeistof te snel verandert, kan HEPES-buffer aan de kweekvloeistof worden toegevoegd tot een eindconcentratie van 10-25 mM;

3. HEPES is een amfoterisch buffer dat voornamelijk wordt gebruikt in biologisch onderzoek, zoals oxidatieve fosforylering, eiwitsynthese in een steriele omgeving, fotosynthetische fosforylering, CO2-fixatie, enz.;HEPES heeft geen effect op de substraten van metaal ionase en is geschikt voor transmissie in elektronenmicroscopie (TEM)In celcultuurmedium is het voordeel dat het een relatief constante pH-waarde kan behouden tijdens open cultuur of celobservatie.of als toevoeging van bicarbonaatbuffer (10-15mM) om de beperking van de cultuuromgeving met een hoge CO2-concentratie te verminderenOploste CO2 en bicarbonaat zijn ook erg belangrijk voor een goede celgroei.