Welke buffer geschikt Tris of EPPS is voor Folin fenolmethode om proteïne te ontdekken?

Het bufferbereik van Tris is ongeveer 6-8, wat geschikt is voor de meeste biochemische experimenten, met name in de bijbehorende onderzoeksexperimenten met eiwitten en nucleïnezuren;EPPS-bufferHet onderzoeksexperiment is duurder dan Tris, dus welke is geschikt voor de Folin fenol methode om eiwitten te detecteren?

De folin-fenol reactiemethode is een basismethode die gewoonlijk wordt gebruikt om de eiwitconcentratie te bepalen en is op grote schaal gebruikt op het gebied van biochemie.EPPS (HEPPS) wordt gewoonlijk gebruikt als buffer voor de folinefenolmethode om het eiwitgehalte te detecteren, in plaats van Tris buffer te gebruiken.

Buffer Tris en EPPS worden gebruikt voor het detecteren van eiwitgehalte

Het kleuringsprincipe van de Folin-fenolmethode voor de bepaling van het eiwitgehalte is hetzelfde als dat van de biuretmethode (maar EPPS kan niet worden gebruikt voor de detectie van biuret/biuret).Het verschil is dat het tweede reagens, het folin-fenol reagens, wordt toegevoegd om de hoeveelheid kleur te vergroten, waardoor de gevoeligheid van het detecteren van eiwitten wordt verbeterd.Het voordeel van de folinefenolmethode voor de detectie van eiwitgehalte is dat deze een hoge gevoeligheid heeft en veel gevoeliger is dan de biuretmethode.Het heeft natuurlijk ook enkele nadelen: het duurt lang, de standaardcurve is niet recht, de specificiteit is slecht en er zijn meer interfererende stoffen.

Elke groep die de biuretreactie verstoort, zoals -CO-NH2, -CH2-NH2, CS-NH2 en Tris buffer, sucrose, ammoniumsulfaat en sulfhydrylverbindingen,kan de foline-fenolreactie verstoren en de laatste veel groter beïnvloeden.Bovendien interfereren fenolen en citroenzuur ook met deze reactie.

Het foline-fenol reagens bestaat uit twee reagentia, waarvan het eerste reagens bestaat uit natriumcarbonaat, natriumhydroxide, kopersulfaat en kaliumnatriumtartraat.De peptidebinding in het eiwit reageert onder alkalische omstandigheden met de kalium-natrium-kopertartraatoplossing om een paars-rode complex te vormenHet tweede reagens is samengesteld uit fosfomolybdiumzuur, fosfotungszuur, zwavelzuur, brom, enz.dit reagens wordt gemakkelijk gereduceerd door de fenolgroep van tyrosine in het eiwit om een blauwe reactie te gevenDeze methode is ook geschikt voor het bepalen van het gehalte aan tyrosine en tryptofaan.Het meetbereik van deze methode is 25-250 μg eiwit.

Samengevat is het voordeel van de folinefenolmethode voor de bepaling van het eiwitgehalte een hoge gevoeligheid, maar het nadeel is dat deze lang duurt en inbreuk maakt.Tris kan ook interferentie veroorzaken.Desheng produceert beide.biologische buffers, niet om te zeggen welke beter is, maar om geschikt te zijn voor verschillende experimentele studies.