Welke buffer geschikt Tris of EPPS is voor Folin fenolmethode om proteïne te ontdekken?

De bufferwaaier van Tris is ongeveer 6-8, die voor de meeste biochemische experimenten, vooral in de verwante onderzoekexperimenten van eiwit en nucleic zuur geschikt is; EPPS is ook geschikt voor eiwit en nucleic zuur. Het onderzoekexperiment is duurder dan Tris, zodat die men voor de Folin fenolmethode geschikt is om eiwitexperiment te ontdekken?

De folin-Fenol reagensmethode is een basisdiemethode algemeen wordt gebruikt om eiwitconcentratie te bepalen en op het gebied van biochemie wijd gebruikt. In praktische toepassingen, wordt EPPS (HEPPS) gewoonlijk gebruikt als buffer voor Folin fenolmethode om eiwitgehalte te ontdekken, eerder dan het gebruiken van Tris-buffer.

De buffer Tris en EPPS wordt gebruikt voor eiwitgehalteopsporing

Het het kleuren principe van de Folin fenolmethode voor de bepaling van eiwitgehalte is hetzelfde als dat van de biuret methode (maar EPPS kan niet voor biuret/biuret opsporing worden gebruikt). Het verschil is dat de tweede reagens, de folin-Fenol reagens, wordt toegevoegd. Om de hoeveelheid kleur te verhogen, daardoor verbeterend de gevoeligheid van het ontdekken van proteïnen. Het voordeel van de Folin fenolmethode om eiwitgehalte te ontdekken is dat het hoge gevoeligheid heeft en is gevoeliger dan de biuret methode. Natuurlijk, heeft het ook sommige nadelen dat het oud neemt, is de standaardkromme niet recht, is de specificiteit slecht, en er zijn meer mengende substanties.

Om het even welke groep die zich in de biuret reactie, zoals - Co-NH2, - de buffer mengen van CH2-NH2, van Cs-NH2 en Tris-, sucrose, het ammoniumsulfaat, en sulfhydryl samenstellingen, kunnen zich in de folin-Fenol reactie mengen en de veel grotere laatstgenoemden beïnvloeden. Bovendien mengen de fenolen zich en het citroenzuur ook in deze reactie.

De folin-fenol reagens bestaat uit twee reagentia. Reagens één bestaat uit natriumcarbonaat, natriumhydroxyde, kopersulfaat en het tartraat van het kaliumnatrium. De peptide band in de proteïne reageert met de oplossing van het het kopertartraat van het kaliumnatrium in de alkalische omstandigheden om een complex purper-rood te vormen. De tweede reagens is etc. samengesteld uit phosphomolybdic zuur, phosphotungstic zuur, zwavelzuur, broom. In de alkalische omstandigheden, wordt deze reagens gemakkelijk verminderd door de phenolic groep tyrosine in de proteïne om een blauwe reactie te geven, en zijn kleurdiepte is evenredig aan het eiwitgehalte. Deze methode is ook geschikt om de inhoud van tyrosine en tryptofaan te bepalen. De metingswaaier van deze methode is 25-250μg-proteïne.

Samengevat, is het voordeel van de Folin fenolmethode om eiwitgehalte te bepalen hoge gevoeligheid, maar het nadeel is dat het oud neemt en zich mengt. Tris kan interferentie ook veroorzaken. EPPS-de buffer zou moeten worden gebruikt. Desheng veroorzaakt beide buffers, om niet te zeggen welke men beter is, maar voor verschillende experimentele studies geschikt te zijn.