Welke factoren kunnen van invloed zijn op de doeltreffendheid van het gebruik van ADPS als chromogeen substraat?

Op het gebied van biologische detectie en diagnose is het chromogene substraat N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methoxyaniline natriumzout (ADPS reagens) een belangrijk reagens geworden in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), biochemische analyse en andere scenario's vanwege de hoge gevoeligheid en stabiliteit. De daadwerkelijke prestaties worden echter vaak beïnvloed door meerdere factoren, wat leidt tot schommelingen in de kleurintensiteit, achtergrondinterferentie of slechte herhaalbaarheid.

1, Substraatkwaliteit

Chemische zuiverheid: De aanwezigheid van onzuiverheden kan niet-specifieke kleuring of competitieve remming veroorzaken. Onvolledig gereageerde tussenproducten kunnen bijvoorbeeld de binding van enzymen aan substraten verstoren, wat leidt tot een verzwakt kleursignaal. Het kiezen van ADPS-grondstoffen met een hoge zuiverheid (≥ 98%) is een voorwaarde om de effectiviteit te garanderen.

ADPS poeder

Deeltjesuniformiteit: ADPS bestaat meestal in poedervorm of kristallijne vorm. Als de deeltjesgrootte niet uniform is, kan dit leiden tot verschillen in oplossingssnelheid, wat de concentratie-uniformiteit in het reactiesysteem beïnvloedt. Grove deeltjes kunnen ook microplaten of instrumentpijpleidingen verstoppen, en optimalisatie door malen of zeven is vereist.

Opslagstabiliteit: ADPS is gevoelig voor licht, vochtigheid en temperatuur. Langdurige blootstelling aan sterk licht kan fotolyse reacties veroorzaken, waarbij kleurloze of weinig kleur ontwikkelende producten ontstaan; Hoge vochtigheid kan echter leiden tot absorptie van vocht en klontering, wat de weegnauwkeurigheid beïnvloedt. Het wordt aanbevolen om apart op te slaan onder donkere, droge en lage temperatuuromstandigheden om herhaaldelijk bevriezen en ontdooien te voorkomen.

2, Reactiecondities

PH-waarde matching: Het actieve centrum van het enzym is zeer gevoelig voor pH. Als de pH van de buffer afwijkt van dit bereik, kan de enzymactiviteit afnemen, wat resulteert in onvoldoende ADPS-kleurintensiteit. Fosfaat, carbonaat en andere buffersystemen moeten worden geselecteerd op basis van de kenmerken van het doelenzym en nauwkeurig worden gekalibreerd met behulp van een pH-meter.

Temperatuurregeling: Het verhogen van de temperatuur kan de moleculaire beweging versnellen en de botsingsfrequentie tussen enzymen en substraten verhogen, maar het overschrijden van de optimale temperatuur kan enzymdenaturatie en inactivatie veroorzaken, wat resulteert in een afname van het ADPS-kleursignaal.

3, Operationele standaardisatie

Oplossing en verdunning: ADPS-poeder moet worden opgelost in gedeïoniseerd water of een speciale bufferoplossing, waarbij het gebruik van oplossingen die metaalionen of organische oplosmiddelen bevatten, wordt vermeden. Tijdens het oplossen voorzichtig schudden of roeren om het ontstaan van bellen door heftig schudden te voorkomen, wat kan leiden tot een lagere werkelijke concentratie. Verdun volgens een gradiënt en meng grondig om overmatige lokale concentratie te voorkomen.

Selectie van de terminatieoplossing: Nadat de kleurreactie is voltooid, moet de terminatieoplossing onmiddellijk worden toegevoegd om de kleur te fixeren. Als de terminatie niet tijdig is, kunnen de kleurproducten blijven ontbinden, wat resulteert in een afname van de absorptiewaarden; De pH- of concentratieafwijking van de terminatieoplossing kan echter de spectrale kenmerken van het product veranderen, wat de nauwkeurigheid van de detectie beïnvloedt.

4, Externe interferentiefactoren

Monsterinterferentie: Hemoglobine, lipiden of geneesmiddelmetabolieten in bloedmonsters kunnen de enzymactiviteit remmen door adsorptie of chemische reacties, of direct binden aan ADPS om kleurloze complexen te vormen.

Reagenskruisreactie: Als er verbindingen met structuren die lijken op ADPS in het detectiesysteem aanwezig zijn (zoals andere aniline-substraten), kan dit niet-specifieke kleurontwikkeling veroorzaken.

Verontreiniging van de container: Als de microplaat of colorimetrische schaal niet grondig wordt gereinigd, kan deze enzymen of substraten van de vorige batch vasthouden, wat leidt tot fout-positieve resultaten.

Het verlopen gebruik van ADPS-poeder leidt niet alleen tot vervorming van experimentele gegevens, maar kan ook veiligheidsrisico's veroorzaken. Daarom is het bij het kopen en gebruiken van ADPS-poeder belangrijk om op de productiedatum en houdbaarheid te letten en op wetenschappelijke wijze met verlopen ADPS-poeder om te gaan. Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. is gespecialiseerd in de productie van nieuwe Trinder-reagentia zoals ADPS. Als u gerelateerde behoeften heeft, neem dan gerust contact met mij op!

Productverpakking

Het verlopen gebruik van ADPS-poeder leidt niet alleen tot vervorming van experimentele gegevens, maar kan ook veiligheidsrisico's veroorzaken. Daarom is het bij het kopen en gebruiken van ADPS-poeder belangrijk om op de productiedatum en houdbaarheid te letten en op wetenschappelijke wijze met verlopen ADPS-poeder om te gaan. Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. is gespecialiseerd in de productie van de nieuwe Trinder-reagentia zoals ADPS. Als u gerelateerde behoeften heeft, neem dan gerust contact met mij op!